远隔缺血预处理防治造影剂肾病中miRNA-134-5p的表达水平及临床意

摘要：目的：研究远隔缺血预处理(RIPC)防治造影剂肾病中miRNA-134-5p的表达水平及临床意义。方法：选取2019年12月-2020年8月在包头医学院第一附属医院心内三科择期接受冠状动脉介入治疗(PCI)的52例冠心病患者为研究对象，随机分为两组，各26例。空白对照组(PC组)在10 s内将袖带压充至20 mmHg,RIPC组在10 s内将袖带压充至200mmHg，两组均维持5 min后放气5 min，而后重复3次此循环。比较两组术后不同时间血肌酐(Scr)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)水平；分析尿液中miRNA-134-5p表达量与术后Scr及尿液中NGAL、KIM-1的相关性。结果：术后4 h、6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组Scr水平低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)；术后6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组尿液NGAL水平低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)；术后2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组尿液KIM-1水平均低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)。RIPC组患者尿液中miRNA-134-5p表达量高于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)。尿液中miRNA-134-5p与Scr、尿液KIM-1的变化无相关性，与尿液NGAL的变化呈明显的正相关性。结论：RIPC可以使尿液中miRNA-134-5p表达水平上调，且与尿液中NGAL水平升高有关，RIPC致使miRNA-134-5p在造影剂所致急性肾脏缺血损伤的保护中起到重要作用。

关键词：远隔缺血预处理;肾脏缺血;造影剂肾病;肾脏保护;

造影剂肾病(CIN)是指在没有其他病因的情况下，在血管内注射碘化造影剂后3 d内发生的肾功能损伤[1]。CIN亦是临床冠心病介入的治疗重要问题，其主要病理生理学过程是肾脏缺血[2]。远隔缺血预处理(RIPC)对心肌产生的保护作用均与mi RNA有关，但目前mi RNA对造影剂所致急性肾损伤的保护机制尚不明确。本研究探讨RIPC患者冠状动脉介入治疗(PCI)后血肌酐(Scr)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的变化情况，明确尿液中mi R-134-5p在RIPC防治CIN中的作用。

资料与方法

选取2019年12月-2020年8月在包头医学院第一附属医院心内三科择期接受PCI的52例冠心病患者为研究对象，随机分为两组，各26例。空白对照组(PC组)年龄53～72岁，平均(62.65±7.45)岁；造影剂用量75～87 m L，平均(81.46±20.90)m L。RIPC组年龄55～70岁，平均(61.77±7.11)岁；造影剂用量70～83 m L，平均(77.96±20.53)m L。两组患者基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：(1)年龄>18岁；(2)择期接受PCI术(2支及以上冠状动脉病变)的患者；(3)伦理符合《世界医学大会赫尔辛基宣言》[3]。

排除标准：(1)行急诊PCI术者；(2)院前急诊提示超敏肌钙蛋白≥0.04 ng/m L;(3)孕期妇女；(4)有尼可地尔和格列本脲使用史；(5)不配合研究或未签署知情同意书者。

方法：两组患者在进入导管室前2 h，在左右双上肢分别测定无创血压，在进入导管室前1 h将袖带血压计在左上肢上臂中间正常捆绑，左上肢监测手指脉搏氧饱和度。RIPC组在10 s内将袖带压充至200 mm Hg，维持5 min后放气5 min，而后重复3次此循环；PC组在10 s内将袖带压充至20 mm Hg，时间与RIPC组相同。两组干预后均进入导管室按常规步骤进行PCI，结束后送回病房。患者术前均常规接受标准化水化治疗。

观察指标：比较两组患者术前与术后2 h、4 h、6 h、12 h、24 h以及48 h的Scr及尿液NGAL、KIM-1水平；检测两组患者尿液中mi RNA-134-5p表达量。检测方法：冻存的尿液融解后按照尿液NGAL及KIM-1 ELISA试剂盒进行测试。对于单独冻存于-80℃冰箱内的术后4 h的尿液标本融解后，采用北京天根公司的试剂盒进行离心柱法提取总RNA、反转录及RT-PCR。分析mi RNA-134-5p与Scr、NGAL、KIM-1之间的关系，构建关系图像。

统计学方法：所有信息及数据采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。正态分布的计量资料以(x±s)表示，方差齐的计量资料多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验；两参数间的关系用Pearson相关分析，以相关系数评价相关性；以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

两组Scr、NGAL、KIM-1水平比较：术前，两组Scr及尿液NGAL、KIM-1水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；术后4 h、6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组Scr水平低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)；术后6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组尿液NGAL水平低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)；术后2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h,RIPC组尿液KIM-1水平均低于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组Scr及尿液NGAL、KIM-1水平比较(±s,pg/m L)

两组尿液中mi RNA-134-5p表达量比较：两组各检验12例患者尿液中mi RNA-134-5p的变化水平，结果显示，RIPC组患者尿液中mi RNA-134-5p表达量高于PC组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者尿液中mi RNA-134-5p表达量比较(±s，μmol/L)

尿液中mi RNA-134-5p的表达量与术后Scr及尿液NGAL、KIM-1水平的相关性分析：通过计算Pearson相关系数，分析RIPC组术后4 h尿中液mi RNA-134-5-p的表达量与术后Scr及尿液NGAL、KIM-1水平的相关性。结果显示，mi RNA-134-5p与Scr、尿液KIM-1的变化无相关性(R=-0.068,P=0.834,P>0.05;R=0.368,P=0.239,P>0.05)，与尿液NGAL的变化呈明显的正相关性(R=0.658,P=0.020,P<0.05)。见图1、图2、图3。

图1 尿液中mi RNA-134-5p表达量与术后Scr的相关性

图2 尿液中mi RNA-134-5p表达量与术后NGAL的相关性

图3 尿液中mi RNA-134-5p表达量与术后KIM-1的相关性

讨论

目前，临床将RIPC应用于CIN的预防中，整体效果良好，无需手术，安全性高，能够在某一器官发生短暂性缺血-再灌注的同时建立保护机制，进而减少因长期缺血造成的远隔器官或组织损伤。

KIM-1是肾脏近曲小管上皮细胞的一种跨膜蛋白[4]，属于免疫球蛋白基因超家族；两组在术后不同时间点的尿液进行KIM-1检测表明，RIPC组的KIM-1水平低于PC组且无增高的趋势，因而得出结论：RIPC可以明显降低KIM-1的表达，对肾脏起到很好的保护作用。而以往的研究，由于对CIN保护作用研究机制的不同，所采取的干预手段也不同，监测的各个时间点指标不同，对其他数据不做对比讨论。由于微小RNA参与了人体细胞的增殖、分化、发育及凋亡等多种生物学变化，并且稳定存在于血清、血浆、尿液和其他液体中，因此本研究进行了RT-PCR，结果发现RIPC组中尿液mi RNA-134-5p水平明显高于PC组；Pearson相关系数分析显示，mi RNA-134-5p与NGAL的变化有明显的正相关性，因此本研究结果提示RIPC所致的mi RNA-134-5p升高与NGAL的变化密切相关，并且其水平的改变与NGAL水平变化一致。

综上所述，RIPC可以使尿液中mi RNA-134-5p表达水平上调，且与尿液NGAL水平升高有关，RIPC致使mi RNA-134-5p在造影剂所致急性肾脏缺血损伤的保护中起到重要作用。

参考文献

[1]董碧蓉科学认识和应对造影剂肾病[J]中国临床保健杂志,2020,23(1):27-29.

[2]林果为，王吉耀葛均波实用内科学[M].15版北京:人民卫生出版社2017:1936.

[3]世界医学大会赫尔辛基宣言人体医学研究的伦理准则[J].中国美容整形外科杂志2008,19(4):323-324.

[4]杨同肖，李永旺造影剂肾病风险评估研究进展[J].心血管病学进展,2019,40(4):641-644.