IgA肾病血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达及与病情程度的相关

摘要：目的：探究IgA肾病(IgAN)血清长链非编码核糖核酸-lnc-TSI(lncRNA lnc-TSI)、长链非编码核糖核酸-生长停滞特异基因5(lncRNA GAS5)表达及与病情程度的相关性。方法：收集2019年1月-2021年1月四川绵阳四○四医院收治的125例IgAN患者的临床资料及血液样本，按照肾间质纤维化(RIF)程度不同分为轻度组(光镜下RIF面积<25%)、中度组(光镜下RIF面积25%～50%)、重度组(光镜下RIF面积>50%)，另选35例体检健康人员血液样本作为对照组。比较各组血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5水平，并分析其与IgAN患者肾功能及RIF程度关系。结果：IgAN患者各组24h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)均高于对照组，肾小球滤过率(eGFP)低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；且随RIF程度增加，24 h尿蛋白、Scr、BUN逐渐升高，eGFR逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)；随着RIF程度增加，血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达水平逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示，IgAN患者血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5水平与RIF程度呈负相关，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达水平在IgAN患者中较低，且与患者RIF程度具有一定相关性，能有效监测和评估患者病情进展。

关键词: IgA肾病; 长链非编码核糖核酸-Inc-TSI;长链非编码核糖核酸生长停滞特异基因5;

Ig A肾病(Ig AN)是一种由免疫蛋白介导的肾小球疾病，其发病率占原发性肾小球肾炎的30%～50%，且多发于青年男性群体[1]。评估Ig AN病情进展程度对选择治疗方案及判断预后具有重要意义，长链非编码核糖核酸(lnc RNA)是一类长度>200个核苷酸的非编码RNA，能参与调节多种基因功能，因其通常具有二级结构从而在人体血液中表达相对稳定。长链非编码核糖核酸-lnc-TSI(lnc RNA lnc-TSI)、长链非编码核糖核酸-生长停滞特异基因5(lnc RNA GAS5)目前已发现在慢性肾功能不全及糖尿病肾病患者中表达异常，推测其可能参与了肾脏病变过程[2]。本次研究旨在探究血清lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5在Ig AN中表达及与病情程度的相关性分析，现报告如下。

资料与方法

收集2019年1月-2021年1月四川绵阳四○四医院收治的125例Ig AN患者的临床资料及血液样本，按照肾间质纤维化(RIF)程度不同分为轻度组(光镜下RIF面积<25%)、中度组(光镜下RIF面积25%～50%)、重度组(光镜下RIF面积>50%)，另选35例体检健康人员血液样本作为对照组[3]。轻度组34例，男21例，女13例；年龄25～59岁，平均(32.05±4.19)岁。中度组40例，男22例，女18例；年龄23～60岁，平均(32.75±3.94)岁。重度组51例，男27例，女24例；年龄24～72岁，平均(33.19±4.26)岁。对照组35例，男18例，女17例；年龄20～63岁，平均(32.81±4.02)岁。各组基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：经病理检测确诊为Ig AN，参考《临床诊疗指南·肾脏病学分册》[4]；受试者年龄≥18岁。

排除标准：合并过敏性紫癜、乙肝等继发性Ig AN、严重代谢疾病、恶性肿瘤等患者；近期曾使用免疫抑制剂、激素等药物药物患者。

方法：采集各组研究对象空腹静脉血，进行肾功能检测。血液样本离心取血清层，采用全自动生化仪检测患者血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)，肾小球滤过率(e GFP)=186×Scr-1.154×Age-0.203×(0.742女性)×1.233。收集各组研究对象24 h尿液，采用双缩脲法定量测定尿蛋白水平。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清Lnc RNA GAS5、lnc RNA lnc-TSI相对表达量。血液样本在4℃条件下以1 700×g离心10 min，收集血清后以2 000×g再次离心10 min，然后将样品保存在-80℃。在样品中加入总RNA抽提试剂(Trizol)，提取总RNA，逆转录合成用于检测lnc RNA的互补脱氧核糖核酸(c DNA)，然后进行实时定量PCR反应，反应条件：95℃，5 min;94℃，30 s;56℃，30 s;72℃，30 s，以2-∆∆Ct法计算待测基因的相对表达量。

观察指标：(1)一般资料：性别、年龄、Scr、BUN、e GFP、24 h尿蛋白；(2)血清lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5表达。

统计学方法：数据运用SPSS 22.0统计学软件分析；计量资料以表示，多组间比较行单因素方差分析，组间两两比较行SNK-q检验；计数资料以[n(%)]表示，等级资料行秩和检验；Spearman相关性分析目的基因表达与RIF程度关系；P<0.05为差异有统计学意义。

结果

各组一般资料比较：Ig AN患者轻度组、中度组、重度组24 h尿蛋白、Scr、BUN均高于对照组，e GFR低于对照组，且经Kendall's tau-b趋势检验可知，随着RIF程度增加，24 h尿蛋白、Scr、BUN逐渐升高，e GFR逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组一般临床资料比较

各组血清lnc RNA GAS5、lnc RNA lnc-TSI表达比较：经方差检验及SNK-q检验，血清lnc RNA lncTSI、lnc RNA GAS5表达在不同RIF程度之间存在显著差异，且经Kendall's tau-b趋势检验可知，随RIF程度增加，血清lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5表达水平逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。Spearman相关性分析显示，Ig AN患者血清lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5水平与RIF程度呈负相关(r=-0.724、r=-0.816,P<0.05)。

表2 各组血清lnc RNA GAS5、lnc RNA lnc-TSI表达比较

讨论

lnc RNA是一类不具备编码蛋白质能力的基因转录产物，在血液、尿液等多种体液中表达稳定，其血清水平可作为多种疾病病情监测的良好指标。既往针对lnc RNA在肾脏疾病中的研究多集中在动物实验，如慢性肾炎、糖尿病肾病、狼疮肾炎等，而大部分尚未在人体肾脏中被证实。与不同种系之间具有高度生物保守性的mi RNAs不同，lnc RNA的保守性较差，因此其在Ig AN患者病情进展过程中的作用需进一步研究和证实[5]。

本次研究发现lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5在Ig AN重度患者中表达明显下降，提示两者可能参与了Ig AN的发病过程。lnc RNA lnc-TSI是转化生长因子-β(TGF-β1)和细胞信号转导分子(Smad3)相互作用的lnc RNA。相关研究显示，在肾功能不全小鼠的肾小管上皮细胞中，lnc RNA lnc-TSI能通过与Smad3的MH2结构域结合抑制TGF-β1/Smad3通路来延缓RIF过程[6]。GAS5可表达于多种组织和器官中，目前已经发现其参与了肾脏缺血/再灌注损伤、足细胞损伤过程。足细胞在维持肾小球正常滤过功能中发挥关键作用，其损伤是引发患者出现蛋白尿及多种肾小球疾病的基本病理表现，这可能是GAS5参与了Ig AN病变过程的原因之一。

本次研究显示，lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5与RIF程度存在一定相关性。RIF是Ig AN病情进展常见的参考指标，其主要通过促纤维化因子作用加快细胞外基质沉积和肾小球基底膜增厚，导致肾小球硬化和肾功能的逐渐丧失，与Ig AN预后密切相关[7]。相关研究显示，lnc RNA GAS5竞争性结合小分子RNA-21(mi R-21)相关位点来活化磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路，同时磷酸酶和紧张素同系物(PTEN)作为mi R-21的内源性靶标和胰岛素信号通路被抑制，引发肾小球系膜细胞异常增殖和肥大，抑制其自噬造成细胞外基质蛋白沉积增加，使足细胞损伤和肾功能减退[8]。而PTEN同时也参与了TGF-β1/Smad3通路调节过程，PTEN表达缺失可激活TGF-β1/Smad3通路从而影响lnc RNA lnc-TSI作用，推测lnc RNA lnc-TSI和lnc RNA GAS5可能通过调节相同的靶基因及信号通路参与Ig AN的RIF过程。

综上所述，血清lnc RNA lnc-TSI、lnc RNA GAS5表达水平在Ig AN患者中较低，且与患者RIF程度具有一定相关性，能有效监测和评估患者病情进展。

参考文献

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